柱后衍生-荧光检测法测定黄曲霉毒素

　　黄曲霉毒素是黄曲霉在生长繁殖过程中产生的一组有毒代谢产物，黄曲霉毒素主要污染粮食和油料作物，如花生、玉米、大米、棉籽等。黄曲霉毒素对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。因此国际上对食品中黄曲霉毒素有严格的限量要求。

　　本文采用高效液相荧光检测器—柱后衍生法对黄曲霉毒素进行测定，通过色谱柱的选择，流动相配比的优化以及检测器条件的调整等手段，以期得到黄曲霉毒素的分离效果。

　　一、实验方法

　　Cometro高效液相色谱系统;

　　荧光检测器，激发波长360nm，发射波长450nm;

　　Cometro柱后衍生系统，柱后衍生70度，衍生剂：碘的0.03%甲醇水溶液，流速0.3ml/min;

　　流动相：甲醇-乙腈-水;

　　流速：0.8ml/min;

　　色谱柱：多种品牌的十八烷基键合硅胶柱;

　　样品：黄曲霉毒素储备液;

　　二、结果与分析

　　1、色谱柱的选型

　　采用四种不同品牌的C18色谱柱，分别标记为进口柱1、进口柱2、进口柱3、Comatex柱。流动相比例为甲醇-乙腈-水=40:18:42，进样量为10μl，比较其分离效果。

　　由实验结果可以看出，四种不同填料的色谱柱中，Comatex柱的分离效果，但仍然不能得到一个良好的分离度，因此，通过改变流动相的比例来进一步改善分离效果。

　　2、流动相配比的优化

　　通过上述实验，选择分离效果的Comatex柱，调节流动相的比例为甲醇-乙腈-水=40:10:50，其他实验条件不变。

　　在该条件下，可以得到一个较好的分离效果。

　　3、检测器条件的调整

　　将工作液稀释25倍后，进样量分别为5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，测定样品的标准曲线。

　　噪音大灵敏度低，信噪比、分离度差。

　　优化调整检测器条件，使用Comatex C18色谱柱，优化流动相，重复上述实验。

　　上述结果显示，基线噪音(0.2mv)，灵敏度，信噪比(>10)，柱效(>9000)，主峰之间的分离度(>1.5)。

　　三、结论

　　通过色谱柱的选择，流动相配比的优化，以及灯的能量的调节，可以提高分离度，降低噪音，提高灵敏度，得到良好的分离效果。采用高效液相荧光检测器-柱后衍生法测定黄曲霉毒素，选用Comatex色谱柱;流动相为甲醇-乙腈-水=40:10:50;优化检测器条件，可以得到分离效果。