液相色谱的这些概念，你可一定要分清
2022-09-14 14:10
高效液相色谱（HPLC）是一门基础分析学科，有许多名称相似的概念。今天兰博就带大家区分一些易混淆的常见液相色谱概念。
1、水峰&倒峰
要知道，在液相色谱中，水出峰通常是作为溶剂出峰，因此在出峰的时间上通常都是位于溶剂峰的位置（0~5min之间）。峰形上，相比于其他有机溶剂的溶剂峰，水峰多表现为明显的基线波动，甚至为倒峰。
而色谱分析中的倒峰则不仅仅局限于水溶剂峰，因此倒峰可能在色谱分析的任何位置出峰。这种情况下，引起倒峰的原因多为在此波长下有造成负吸收的杂质通过检测器，或更有甚者，检测器的电极接反了。
2、溶剂峰&空白峰
溶剂峰，顾名思义就是溶解样品溶剂出的峰。如样品用甲醇溶解，单独进甲醇溶剂的峰即是溶剂峰。
空白峰和溶剂峰这两个概念经常被分析工作者混淆，但严格来说，空白峰指的是样品基质本底的出峰情况（即空白基质样品），并不仅仅指溶剂峰。若是简单的小分子极性化合物，溶剂峰和空白峰在谱图上通常无较大区别；而若是蛋白、食品等基质本底干扰不可忽略的样品，空白峰往往比溶剂峰要复杂。
3、进溶剂空白&进空针
既然讲到了空白峰，那就不得不多说一句。我们在进行常见色谱峰异常问题排查的过程中，经常需要寻找异常峰的来源，这时就经常要进行两个步骤：
1、进空针；
2、进溶剂空白。这两步的概念千万不可混淆。进溶剂空白很好理解，指进空白溶剂；进空针指的是仪器空运行一针，相当于运行一针流动相，不是指进空白溶剂，也不是指拿下色谱柱接两通进样。
若色谱运行过程中出现异常峰，建议各位老师按照先进空针，再进溶剂空白的顺序排查。若进空针无异常，进溶剂空白也无异常，说明异常峰来源于样品本身（基质本底）；若进空针无异常，进溶剂空白有异常，说明异常峰来源于溶剂空白；若进空针有异常，说明异常峰来源于系统污染（包括仪器、管路、进样系统、流动相），或色谱柱污染。
4、鬼峰&干扰峰
鬼峰(Ghostpeak)：是对未知来源的色谱峰的统称。色谱分离过程中，特别是在梯度洗脱或者仪器使用时间过久容易产生时有时无的色谱峰，因此鬼峰最大的特点就是“飘忽不定”，“神出鬼没”，这种特性通常体现在保留时间不稳定和峰面积不稳定上。鬼峰的来源有很多，但流动相梯度变化产生的鬼峰是最棘手，也最常见的。
而干扰峰因为已经知道是来源于污染物的干扰，因此干扰峰与鬼峰最大的区别就是干扰峰往往出峰时间较为固定（有时候峰面积甚至都没太大变化）。因此面对干扰峰，我们就从色谱柱污染、样品污染、试剂污染、流动相污染这几个方面来排查就好了。
5、重复性&重现性
重复性（repeatability）与重现性（reproducibility）都是用来评价分析结果的精密度，二者都是用分析结果的RSD值来表示，但二者的实际意义是不一样的。
重复性：是指同一分析人员在同样实验环境下，相同实验条件所得的分析结果的精密度；
重现性：是指不同分析人员或不同实验室，在各自的实验环境下，相同实验条件所得的分析结果的精密度；
相比重复性，重现性提出了更高的精密度要求。重复性好，重现性未必好；而重现性好，重复性则一定好。对现代仪器分析而言，重复性是容易实现的，而重现性的实际意义更大，也是方法验证所必须考察的。
6、柱床塌陷&相塌陷
柱床塌陷又叫填料塌陷，是指色谱柱使用一段时间后色谱柱入口处的柱床产生可见的空隙。该空隙的存在增大了死体积，会导致色谱柱柱效下降。造成柱床塌陷的原因如下：
一，色谱柱填装时的压力过低，填装不紧密，在高压下使用一段时间，开始出现空隙；
二，操作压力超出色谱柱填料的耐压值，导致填料颗粒破碎产生空隙；
三，极端流动相（如pH>8.0）溶解填料导致空隙出现；
四，极端流动相（如pH<1.5）使得键合相脱落，填料松动；
键合相塌陷是指由于流动相极性与键合相极性相差太大，键合相无法在流动相中充分伸展而倒伏、缠结在一起，比如普通C18在高比例水相条件下。相塌陷会导致色谱柱对化合物的保留不足。单纯的相塌陷不会导致柱床填料的损坏，且通常可恢复。
(a)在甲醇水流动相下的碳链形状
(b)100%水流动相下的碳链形状
以上是我们在进行高效液相色谱实验中常易产生混淆的概念。HPLC技术如今已广泛应用与食品、医药、化工等领域，注意理清基本概念将极大程度帮助我们节省分析成本。