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专业人员解读氨基酸分析仪的原理和操作方法

发布日期:2022-02-10 13:26:34 来源:天津市兰博实验仪器设备有限公司
 
  氨基酸分析仪可对氨基酸各组分进行定性、定量分析。氨基酸分析仪也可利用阴离子交换分离后经积分脉冲安培法检测,该检测方法无需将待测氨基酸进行柱前或柱后衍生。
 
  氨基酸分析仪的工作原理:
 
  测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同,在阳离子交换柱上将它们分离,采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来,再逐个以另一流路的茚三酮试剂混合,然后共同流至螺旋反应管中,于一定温度下(通常为115~120℃)进行显色反应,形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物,其最大吸收在440nm。
 
  氨基酸分析仪的操作方法:
 
  样品处理
 
  测定样品中各种游离氨基酸含量,可以除去脂肪杂质后,直接上柱进行分析。
 
  测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解,使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。
 
  样品分析
 
  经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol左右(水解样品干重为0.3mg左右)。测定必须在pH5~5.5、100℃下进行,反应进行时间为10~15min,生成的紫色物质在570nm波长下进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析一般只需1h左右,同时可将几十个样品一起装入仪器,自动按序分析,最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1~3%。
 
  结果计算:
 
  带有数据处理机的仪器,各种氨基酸的定量结果能自动打印出来,否则,可用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。另外,根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。
 
  说明:
 
  ①显色反应用的茚三酮试剂,随着时间推移发色率会降低,故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。
 
  ②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪,可使蛋白质水解出的17种氨基酸在12min内完成分离,且具有灵敏度高(最小检出量可达1pmol)、重现性好以及一机多用等优点。
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