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美国兰博氨基酸分析仪测定复方氨基酸注射液(18AA)中胱氨酸的含量

发布日期:2017-06-26 14:35    来源:兰博实验仪器设备
美国兰博氨基酸分析仪测定复方氨基酸注射液(18AA)中胱氨酸的含量
复方氨基酸注射液(18AA)收载在《中华人民共和国卫生部药品标准》(二部)第六册(生化药品第一分册)中,该标准无胱氨酸含量测定要求。胱氨酸是构成蛋白质的重要氨基酸,在生理学上起着十分重要的作用。胱氨酸的定量测定多采用高效液相色谱法、氮测定法、比色法、电泳试验法等。这些方法常受到共存氨基酸的干扰,对非单一胱氨酸体系选择性不好。同时,由于处方中胱氨酸的含量较低[含胱氨酸0.01%(规格5%)和0.024%(规格12%)],几乎无紫外吸收以及复方氨基酸注射液(18AA)多重组分的复杂性和氨基酸化学结构的特殊性,无法建立有效的胱氨酸含量测定方法。本实验报道了柱前衍生-氨基酸分析仪测定复方氨基酸注射液(18AA)中胱氨酸的含量,有较好专属性和准确度,待测物分辨率好,样品稳定。
美国兰博LBA800氨基酸分析仪
仪器:
美国兰博LBA800氨基酸分析仪;
离子交换柱 (4.6 mm×60 mm,3 μm);
柱温:135 ℃;
可见光检测器波长:570 nm;
流动相流速:0.4 mL/min;
分析时间:30 min。
进样量:2 μL。
胱氨酸对照品(中国生物制品鉴定研究院,批号:140624-200805,含量:100.0%);复方氨基酸注射液(18AA)(某企业提供,28 批次,规格:5%和12%);
水为重蒸水;其余试剂均为分析纯。
茚三酮溶液。
 
测定方法:
分别取对照品溶液和供试品溶液1.0 mL,加入30%过氧化氢溶液-甲酸(1∶9) (临用新制) 10 μL进行氧化处理,置冰水浴中2 h,真空干燥后,加入0.02 mol·L1 盐酸溶液1.0 mL 溶解,用0.22 μm的滤膜过滤后进入氨基酸分析仪进行分析。
本法是将胱氨酸衍生为磺基丙氨酸后用氨基酸分析仪来测定,磺基丙氨酸保留时间较短,不受其他氨基酸的干扰,分离度较好,样品稳定,能够设置较短的分析时间(30 min,包括再生时间)。天津兰博应用实验室尝试将胱氨酸衍生为磺基丙氨酸后用HPLC 测定,但是供试品溶液中其他氨基酸有干扰,分离度达不到要求。不经过柱前衍生,用氨基酸分析仪测定能够检出胱氨酸,但是其响应较低,且与基线分离不完全,无法定量计算。
 
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