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黄曲霉毒素检测方案—HPLC(药典方法)

发布日期:2016-03-25 10:30    来源:未知

中药材中黄曲霉毒素检测方案—HPLC(药典方法)

  来源:实验室资讯网  
核心提示:黄曲霉毒素危害:黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于药材、谷物、
 黄曲霉毒素危害: 
    黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于药材、谷物、坚果、棉籽以及动物饲料相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。 
国家重视程度:
    近年来,各级食品药品监管部门不断加大中药生产流通监管力度,努力保持中药质量总体稳定。
    国家食品药品监督管理局关于规范中药生产经营秩序严厉查处违法违规行为的通知(国食药监安[2012]187号中,要求加强对重金属及有害元素、农药残留、黄曲霉毒素等安全性指标的检测和控制,切实保证中药材质量和安全,另要求企业具备与生产品种相适应的检验设备和能力,严把质量检验关。《国家药品安全“十二五”规划》,规划中明确提出“开展药品快速检验技术研究,搭建检验技术共享平台”、“加快推进药品快速检验技术在基层的应用,配置快速检验设备”、“加强县级机构快速检验能力建设”的要求。
中药中黄曲霉毒素的检测方法:
    2010版《药典》附录IX V 黄曲霉毒素测定采用高效液相色谱法,另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。
华安麦科作为国内最早从事霉菌毒素检测研究的高新技术企业对黄曲霉毒素检测也有深刻的探索研究,下面就我们的实践和大家分享一下,免疫亲和柱-高效液相色谱法-柱后光化学衍生等内容。
【原理】:
    样品经甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱层析净化,黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上,此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性,用水将免疫亲和柱上杂质除去,以甲醇通过免疫亲和柱洗脱,再经光化学衍生器柱后衍生,以提高检测准确性。
【主要试剂及耗材】:
ToxinFast®气控操作架:含气泵
ToxinFast®黄曲霉毒素免疫亲和柱1ml或3ml
ToxinFast®光化学衍生器
ToxinFast®玻璃微纤维滤纸 :直径11cm、孔径1.5µm
ToxinFast®玻璃试管:直径12mm,长75mm,无荧光特性
ToxinFast®注射器:10ml、20ml
【检测步骤】:
    样品粉碎——提取——洗脱液进样、亲和柱净化——化学衍生——检测数值(做过液相的都知道这些步骤的,在这里就简单提一下,主要是为什么用到气控操作架和化学衍生器在下面解释一下!)
气控操作架的使用说明:
    在样品粉碎后需要过亲和柱净化,也就是怎么方便亲和柱使用操作的问题,气控操作架能有效地提高这个环节的工作效率(很方便操作的),如图示:
1 连接组装好的气控操作架,将免疫亲和柱、注射器针筒与气控操作架连接,如图所示;
   
 
将处理后的溶液上样;

 
调节空气泵旋钮以控制流速,使样液以1-2d/s的速度流出;

4,待样液完全排干,用去离子水或蒸馏水以2-3d/s的流速洗涤两次,每次10ml;
5,待液体完全排干,将样品瓶置于亲和柱下方,上样1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排干。
以上操作步骤是用免疫亲和柱--高效液相法检测中药中黄曲霉毒素的必经步骤,如使用气控操作架就能很好的固定亲和柱并以可控流速操作,既高效也能使操作误差减到最小。
华安麦科ToxinFast®气控操作架具有6支可控支流,能同时有效检测多个样本,还适用于
1ml和3ml多种规格免疫亲和柱。
为什么使用光化学衍生器?
    由于黄曲霉具有较强的紫外吸收和产生荧光的特性,因此可以进行HPLC-紫外或荧光检测,但是同时黄曲霉毒素中的B1、G1由于其在含水的流动相中容易产生荧光淬灭,因此在很多的实验中都会采用衍生法测定黄曲霉毒素。
衍生的方法也很多:有柱前的,柱后的,在线的,由于在线的柱后光化学衍生有明显的优势,所以现在被增补为药典的检测方法,优势主要在于(无需任何化学试剂、对人员无伤害;无需人员直接操作、避免误差; 无需担心衍生液腐蚀检测器
 
 
大家看完上图肯定也能感受到在线光化学衍生的效果,希望这个分享可以给大家做黄曲霉毒素检测时提供小小的帮助。
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